Cyto-histochemické
metody Histochemické
(ev. cytochemické) metody slouží ke kvalitativnímu, kvantitativnímu a topickému
průkazu chemických látek ve tkáních a buňkách živočichů a rostlin.
Mnohé z nich se používají již dlouhá desetiletí, takže je dnes řadíme
mezi "klasické" (např. průkaz anorganických látek, glykogenu,
lipidů atd.). Během doby byla vypracována histochemická systematika
kvalitativního průkazu sacharidů, lipidů, bílkovin, enzymů, nukleových
kyselin, pigmentů, organických sloučenin a anorganických prvků. K tomu dále
přibyl vysoce specializovaný úsek kvantitativní cyto-histochemie. V současné
době je rozpracována obzvláště oblast imunohistochemie a enzymové
histochemie. Vztah histochemie k biochemii je velmi úzký. Biochemie
vládne metodicky daleko přesnějšími, zejména kvantitativními postupy,
ale její možnosti spočívají v analýze značně heterogenních tkáňových
a buněčných homogenátů, tedy v analýze "extra situm".
Naproti tomu cyto-histochemie zkoumá chemické látky v kontextu s jejich základní
strukturální topikou v buňce či tkáni (analýza "in situ"
- tzv. histotopochemie). Oba přístupy se tedy nevylučují, nýbrž vhodně
doplňují.
Na
příkladu enzymově-histochemické metodiky uvedeme pracovní způsob
v cyto-histochemii.
K
histochemickému průkazu enzymů slouží celá řada metod s cílem přesné
lokalizace enzymové aktivity "in situ". Výsledek metody by
měl být nezávislý na způsobu zpracování, i když v praxi je tento požadavek
obtížným problémem. Principem průkazních metod k detekci enzymů je
reakce produktu vzniklého působením enzymů na substrát a jeho
vizualizace různými způsoby, např. redoxními indikátory či srážecími
reakcemi s kationty těžkých kovů, metodami azokopulačními a indigogenními.
Z biochemicky dosud prokázaných enzymů lze histochemicky detekovat jen asi
jednu desetinu. Průkaz aktivity enzymů v topickém vztahu blízkém podmínkám
"in vivo" vyžaduje použití speciálních technik (mrazení,
mrazová sublimace, kryostatové řezy apod.). Obecně jsou tyto techniky
mnohem šetrnější, než běžné zalévání do parafínu, a omezují difúzi
enzymů ze struktur, na něž jsou vázány.
Větší
část popsaných histochemických metodik proniká dnes do rutinní
diagnostické praxe
a stala se značným přínosem pro zdokonalení diagnostiky v patologii,
hematologii a řadě dalších morfologických oborů.
Fotogalerie
 |
Průkaz alkalické fosfatázy v kutikulární membráně
enterocytů z bioptického vzorku střevní sliznice. Výsledné azobarvivo konturuje povrchový reliéf klků. Azopulační
reakce. Mikroskop AMPLIVAL ZEISS Jena. Zvětšení 180x.
(R. Koďousek) |
 |
Průkaz
cytokeratinu v epitelu alveolu lidské mléčné žlázy. Nepřímá imunoperoxidázová technika s využitím monoklonální protilátky. FOTOMIKROSKOP ICM 405 OPTON. Zvětšení 400x. (J. Bártek) |
 |
Adiaspora
houby Chrysosporium parvum var. crescens - původce adiaspiromykózy. Nativní
preparát, agarová kultura. Azokopulační reakce na průkaz kyselé fosfatázy.
Mikroskop ZEISS NfPK. Zvětšení 1035x. (R. Koďousek, M. Hejtmánek) |
|