Fluorescenční mikroskopie
Fluorescenční
mikroskopie umožňuje zobrazit určité látky obsažené v
buňkách často v minimálním množství. Metoda je založena na skutečnosti,
že některé chemické látky (fluorochromy) po dopadu světla o kratší
vlnové délce září světlem o delší vlnové délce - tedy světlem jiné
barvy. Tento jev se nazývá fluorescence. Je projevem intramolekulové
energetické změny vzbuzené v látce absorbovaným zářením.
Princip
nejčastěji užívaného postupu spočívá ve vazbě fluorochromu na určitou
buněčnou složku (polysacharid, protein), která pak např. v modrém budícím
světle září světlem žlutým. Aby modré světlo budící fluorescenci
nevadilo při pozorování, musí být odstraněno bariérovým filtrem. Ten
pohltí modré světlo vycházející z preparátu do objektivu a do okuláru
propustí jen světlo žluté. Výsledkem je tedy obraz žlutě zářících
struktur v temném poli.
Varianta
této metody s použitím mnoha různých fluorochromů se užívá k
vizualizaci buněčných jader, chromozomů, jadérek, cytoskeletu a jeho
složek, specifických buněčných antigenů a dalších struktur. V
mikrobiologii slouží k mikroskopickému průkazu mikroorganismů v klinických
vzorcích (sputum, moč, kožní šupiny aj.). V imunodiagnostice se užívá
k detekci buněčných antigenů sdružených s určitými chorobami.
Podstata této imunofluorescenční metody je v tom, že molekuly protilátky
(zpravidla monoklonální) označené navázaným fluorochromem se specificky
vážou s molekulami buněčných a tkáňových antigenů, čímž vznikají
komplexy (antigen+protilátka+fluorochrom), které ve vhodném budícím záření
v mikroskopu fluoreskují a tím indikují přítomnost antigenu v buňce či
tkáni.
Fluorescenční
mikroskopické metody se stále více uplatňují diagnostickými aplikacemi
v klinice. Perspektiva jejich přínosu je založena na skutečnosti, že
teoreticky umožňují vizualizovat kterýkoli genový produkt na buněčné
úrovni.
Fotogalerie
|
Řez mozkem člověka postiženého mykózou. Houbové buňky vyplňují lumen cévy a prorůstají její stěnu. Mozková tkáň a krevní buňky nejsou metodou zobrazeny. Barvení Blankophorem.
Mikroskop FLUOVAL ZEISS Jena. Zvětšeno 510x. (M. Hejtmánek, R. Koďousek) |
|
Řez plicní tkání, ve které září stěny kulovitých buněk (adiaspor) mikroskopické houby
Chrysosporium parvum var. crescens. Barvení Blankophorem.
Mikroskop FLUOVAL ZEISS Jena. Zvětšeno 1390x. (M. Hejtmánek) |
|
Buňky mikroskopické houby Chrysosporium
keratinophilum. Jádra fluoreskují žlutě, cytoplasma červeně. Mikrokultura na agarovém médiu po fixaci barvená akridinoranží.
Mikroskop FLUOVAL ZEISS Jena.Zvětšeno 1690x. (M. Hejtmánek) |
|
Intermediární filamenta keratinového typu v buňkách linie BT 20 (karcinom prsu) kultivované in vitro. Nepřímá fluorescence (FITC), jádra (žlutě) dobarvena ethidium bromidem.
Mikroskop ICM 405 C, ZEISS, NSR. Zvětšení 1540x. (J. Bártek) |
|