Impregnační
metody Princip
impregnačních metod spočívá ve vysrážení solí těžkých kovů (nejčastěji
stříbra) na některých buněčných, případně i mimobuněčných
strukturách. Největší použití a zásadní význam mají tyto metody v
neurohistologii. Podle způsobu provedení je dělíme na impregnaci in
toto, při kterých impregnujeme celý bloček nervové tkáně, a na impregnaci
v řezech - buď zmrazených nebo parafínových. K prvé skupině patří
impregnační metoda podle Golgiho, která při svém zavedení měla mimořádný
význam pro poznání základní stavby nervového systému a neztratila své
důležité postavení ani v součastnosti, např. v kombinaci s metodami
elektronové mikroskopie. Princip této metody spočívá v tom, že bločky
nervové tkáně se především fixují ve směsi dvojchromanu draselného s
oxidem osmičelým a poté impregnují v roztoku dusičnanu stříbrného.
Hlavní předností této metody je, že se ve tkáni CNS z velkého množství
neuronů impregnují pouze některé a u těchto neuronů se vyredukované stříbro
ukládá nejenom v jejich tělech, ale i ve všech výběžcích, dendritech
i neuritech až do nejjemnějšího terminálního větvení. Bloky krájíme
na poměrně tlusté řezy (100-200 um), ve kterých můžeme sledovat
detailní větvení dendritického stromu i průběh axonů a nervových
drah. V současné době se k vyhodnocování těchto preparátů používá
počítačová technika, umožňující přesné prostorové znázornění
celého neuronu.
Z
impregnačních metod prováděných na zmrazených řezech se nejvíce osvědčila
metoda podle Bielschowského, Grossové a Lavrentěva. Tato metoda používá
k impregnaci amoniakálního roztoku stříbra a je vhodná především pro
znázornění nervových vláken v periferním nervovém systému a k
demonstraci nervových zakončení. V parafínových řezech provádíme
impregnaci nervových vláken jak z centrálního, tak i z periferního
nervového systému pomocí koloidního roztoku stříbra (Protargol-proteinát
stříbra) v metodě podle Bodiana.
Kromě
neurohistologie se impregnační metody používají i v cytologii, např. při
průkazu Golgiho komplexu, k průkazu kalcia (fosfátů), k impregnaci buněčných
hranic a stěn apod. Z extracelulárních struktur můžeme s použitím
impregnačních stříbřících metod prokazovat např. retikulinová vlákna.
Impregnační metody s využitím fenoménu tzv. "argyrofilie" a
specifické "argentafinity" sehrály velkou roli v identifikaci buněk
periferního endokrinního systému, a jsou i v dnešní době významnou
pomocí v histopatologické diagnostice, zejména některých nádorů
neurogenního a endokrinního základu. Tyto metody se rovněž uplatňují v
histologické diagnostice bakteriálních a mykotických infekcí (např. stříbření
spirochet, Grocottova metoda k průkazu plísní a kvasinek).
Fotogalerie
|
Nervová buňka s tělem (P = perikaryon), z něhož vybíhá strom dendritu (D) a z báze odstupuje tenký neurit (a = axon). Impregnace metodou Golgiho.
Mikroskop ZEISS NfPK. Zvětšení 1130x. (J. Malínský) |
|
Purkyňova buňka mozečku se znázorněnými výběžky a neuroaxony. Impregnační stříbřící metoda "K1" s fyzikálním typem vyvíjení.
Mikroskop AMPLIVAL ZEISS Jena. Zvětšení 600x. (R. Koďousek) |
|
Argyrofilní buňky (A) Langerhansova ostrůvku pankreatu člověka (pozitivní buňky černě). Impregnační stříbřící metoda s fyzikálním principem vyvíjení.
Mikroskop AMPLIVAL ZEISS Jena. Zvětšení 940x. (R. Koďousek) |
|
Kvasinkový mikroorganismus - původce kryptokokózy v plicní tkáni. Některé buňky (tmavohnědé) pučí. Grocottova metoda.
Mikroskop AMPLIVAL ZEISS Jena. Zvětšení 2240x. (R. Koďousek, M. Hejtmánek) |
|